研究发现你真的会用血球计数板吗

小扣柴扉 · 发表于 2023-5-18 18:23:31

血球计数板计数细胞浓度和活率是一个比较常规简单的方法，但是您真的会用吗下面小编跟大家聊聊如何正确使用血球计数板。在业界当中，

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血球计数板计数室一览

血球计数板用质厚玻璃制成。每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池。计数池两侧各有一支持柱，将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0的计数池。计数池放大后如下图1所示

哪里是我们进行计数的区域

整个格区域分为9个大方格，其中四角及中间大方格为我们的计数区域，我们根据大方格中小方格数分两种：如下图2色区域和下图2蓝色区域，两个区域计数体积相等，计数体积为1*1*=；其中色区域又平均分个较小方格，通常为了减少工作量，只计数其中5个更小的方格，如下图2亮色区域；蓝色计数区域则平均分为个较小的方格。

如何不同区域细胞进行计数

小方格的蓝色和小方格的色计数区，长宽都是1，盖玻片覆盖在计数池上方形成深度的空间，我们可以得出两个区域可以充满的液体体积为：1×1×=，细胞浓度=#=测量区域细胞个数测量区域体积×稀释倍数=测量区域细胞个数×1×稀释倍数。下面我们分别总结下不同的方格计算公式：

小方格计数区计算公式：1、如果计数的是1个如上图2所示蓝色区域：#=细胞个数×1×稀释倍数2、如果计数的是4个蓝色区域：#=4个大方格细胞个数4×1×稀释倍数3、如果只计数蓝色区域格中的一个小方格：#=细胞个数×1××稀释倍数

小方格计数区计算公式：

1、如果计数的是1个如上图2所示整个色区域：#=细胞个数×1×稀释倍数：

2、如果计数的是1个如上图2所示色区域中的一个小方格：#=细胞个数×1××稀释倍数3、如果计数的是1个如上图2所示色区域中的四角及中间5个小方格：#=细胞个数×1×5×稀释倍数

如何选择比较合适的计数区进行计数

根据细胞密度判断，如果密度比较小，可以计数蓝色区域大方格，如果细胞密度适中，可以计数蓝色区域个大方格中的一个，如果细胞密度较小，则计数色区域方格中的较小方格，但是论选择哪种方式计数，每个方格中至少有-50个细胞来计数；细胞密度过高，往往会更容易造成操作者疲劳增加出错概率，故建议每个方格中比较多计数0个左右细胞为宜。

根据细胞大小进行判断，通常μ以上的细胞选择蓝色区域，μ以下的细胞选择色区域计数；这主要跟计数区域面积及显微镜放大倍数有关，μ以下的细胞需要切换高倍物镜才能看清细胞形态，而高倍物镜下面法显示大方格完整区域，故选用格计数区域中较小方格更好；计数原则：如果有细胞落在方格边缘线上，那么可以记上不计下，计左不计右。计数区域大小也是决定结果准确很重要的因素，建议尽量计数4个上图2所示蓝色区域进行计数，从而减少加样的分布误差及由于计数样本量过少带来的误差。

总结

综上，计数需要注意事项如下：

1、保持计数板及盖玻片清洁干燥；

2、保持稳定的计数小室：先加盖专用的盖玻片（比普通盖玻片厚一些），形成稳定的计数室，一次性充满计数室，减少多余细胞液溢出导致的误差，这里一般加样微升；

3、保证细胞完全沉降：加样后，一般需静置3-5左右，使细胞完全沉降到计数板底部；
4、在比较适范围内计数：以μ直径大小细胞为例，血球计数板计数范围：1××1，但是由于血球计数板本身属于抽样计数法，抽样个数过少会造成计数不准，相反，如果细胞密度过大，会加重操作者的疲劳和负担，同样也会造成计数不准，建议加样浓度为2××1为宜。

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